- 賽事資訊
- 職教新聞
- 新聞專(zhuān)題
- 汽修專(zhuān)業(yè)
- 數(shù)控專(zhuān)業(yè)
- 電子專(zhuān)業(yè)
- 加工制造
- 機(jī)電專(zhuān)業(yè)
- 模具專(zhuān)業(yè)
- 電氣信息
- 旅游管理
- 建筑專(zhuān)業(yè)
- 信息技術(shù)
- 化工專(zhuān)業(yè)
- 機(jī)械制造
- 財(cái)經(jīng)專(zhuān)業(yè)
- 餐飲專(zhuān)業(yè)
- 酒店專(zhuān)業(yè)
- 商貿(mào)專(zhuān)業(yè)
- 醫(yī)藥衛(wèi)生
- 地質(zhì)勘察
- 交通土建
- 財(cái)經(jīng)商貿(mào)
- 鐵道工程
- 服裝設(shè)計(jì)
- 基礎(chǔ)課程
- 美容美發(fā)
- 農(nóng)林牧漁
- 包裝印刷
- 材料能源
- 法學(xué)專(zhuān)業(yè)
- 公共事業(yè)
- 生物工程
- 市場(chǎng)營(yíng)銷(xiāo)
- 資源環(huán)境
- 機(jī)器人
- 無(wú)人機(jī)
- 通用性技能知識(shí)
- 綜合
當(dāng)前位置:首頁(yè) > 文章資訊 > 農(nóng)林牧漁 > 豬場(chǎng)檢疫非洲豬瘟PCR熒光定量樣品采集的嚴(yán)格要求
豬場(chǎng)檢疫非洲豬瘟PCR熒光定量樣品采集的嚴(yán)格要求
一個(gè)完整的非洲豬瘟病原熒光定量PCR檢測(cè)流程一般包括:樣品采集及保存;樣品前處理;核酸提取與配液;上機(jī)擴(kuò)增;檢測(cè)結(jié)果導(dǎo)出及分析等。
從實(shí)驗(yàn)流程來(lái)看
樣本的正確采集及運(yùn)輸是保證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的首要因素。
采集什么樣品?多少數(shù)量合適?怎么規(guī)范采集?采集后該怎么處理?如果不進(jìn)行及時(shí)檢測(cè),又該怎么保存樣品?檢測(cè)完的樣本又該怎么處理?
以檢測(cè)非洲豬瘟病毒為例,參考FAO《非洲豬瘟-發(fā)現(xiàn)與診斷》中文版如進(jìn)行非洲豬瘟病毒檢測(cè),病原學(xué)樣品包括:
1. 抗凝血(全血):
采集:使用含有抗凝劑(EDTA-紫色蓋)的無(wú)菌管(真空采血管)從頸靜脈、下腔靜脈或耳緣靜脈抽取全血5ml。如果動(dòng)物已經(jīng)死亡,可以從心臟中采血,但必須立即進(jìn)行。冷藏運(yùn)輸,到達(dá)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室后,可選擇-70℃冷凍保存。
注意:不能使用肝素(綠色蓋子)的無(wú)菌采血管,會(huì)抑制PCR反應(yīng),易造成假陰性。
2. 血清:
采集:使用未加抗凝劑的真空采血管從頸靜脈、下腔靜脈、耳緣靜脈,或剖檢過(guò)程收集5ml血液樣品,建議先在4℃放置14-18小時(shí)分離血凝塊,丟棄凝固物,并離心10-15分鐘,回收澄清的上清液(血清),血清樣品在分離后可以立即開(kāi)展檢測(cè),也可冷藏運(yùn)輸,到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后,可選擇-70℃冷凍保存。
注意:如血清是紅色,已經(jīng)發(fā)生溶血,不能用于ELISA檢測(cè)。
3. 器官和組織樣品
采集:目標(biāo)器官是脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、腎臟等,其中脾臟和淋巴結(jié)通常病毒含量最高,冷藏運(yùn)輸,盡快提交給實(shí)驗(yàn)室,如無(wú)法及時(shí)送檢,可將樣品儲(chǔ)存在冷庫(kù)或液氮中??捎?0%緩沖福爾馬林浸泡30分鐘以上進(jìn)行病毒的滅活之后再進(jìn)行PCR的檢測(cè)。
注意:如豬場(chǎng)發(fā)現(xiàn)疑似非洲豬瘟癥狀,為避免污染場(chǎng)內(nèi)環(huán)境和人員,請(qǐng)勿在豬場(chǎng)內(nèi)剖檢,盡量求助實(shí)驗(yàn)室,根據(jù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,病死豬每克組織中含PLD50病毒含量達(dá)10萬(wàn)以上。
4. 軟蜱
采集:收集軟蜱,盡量讓蜱存活以確保蜱內(nèi)病毒的保存完好,并避免DNA降解??蓪⑹占拟g緣軟蜱放入有螺旋蓋的樣品瓶/管中,放入少量土壤,蓋內(nèi)襯以紗布,常溫保存運(yùn)輸。到達(dá)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室后,-70℃ 冷凍保存或置于液氮中;如僅對(duì)樣品進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,可以放入100%酒精中保存。
注意:其余如蚊蠅等昆蟲(chóng)同樣如此,盡量使其存活送檢,或者直接儲(chǔ)存在液氮中。
5. 環(huán)境樣品
采集:可多采集環(huán)境拭子,如糞便,泔水,飼料等,4℃保存。
6、唾液樣品
除上訴非洲豬瘟疫情應(yīng)急實(shí)施方案(2019年版)中提到的相關(guān)病原學(xué)樣品外,根據(jù)非洲豬瘟的同居感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,非洲豬瘟自然感染情況下病毒最早出現(xiàn)在唾液中,因此建議在無(wú)癥狀豬群定期排查時(shí)使用唾液作為檢測(cè)對(duì)象。
采集:采集唾液前盡量對(duì)豬群實(shí)行停料不停水,可選擇控食過(guò)夜,在第二天進(jìn)食前采集唾液,保證唾液里面沒(méi)有食物殘?jiān)?,確保唾液樣本質(zhì)量不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果,同時(shí)采集到的唾液如果1小時(shí)內(nèi)不能做核酸提取就需要馬上冷凍。
為了獲得正確的診斷,必須在適當(dāng)?shù)臏囟认?,以最快的速度正確采集樣品,仔細(xì)進(jìn)行包裝保存、做好標(biāo)記,盡快到達(dá)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室,運(yùn)輸?shù)臉悠繁仨氂凶銐驍?shù)量的冷卻材料,例如冰袋,以防止變質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)室工作是特別需要樣本支撐的!如果樣品狀況不佳,后續(xù)工作可以不用開(kāi)展,因?yàn)?/span>無(wú)法做出準(zhǔn)確的診斷。
筆者言:對(duì)于高效、科研機(jī)構(gòu)、動(dòng)檢動(dòng)監(jiān)、屠宰企業(yè)、集團(tuán)化企業(yè),有專(zhuān)業(yè)的實(shí)驗(yàn)室、專(zhuān)業(yè)的人員、專(zhuān)業(yè)的素質(zhì)用PCR做檢測(cè)是最科學(xué)準(zhǔn)確的。PCR設(shè)備并不適合現(xiàn)場(chǎng)使用,主要是環(huán)境中可能會(huì)存在的污染,非常容易導(dǎo)致“假陽(yáng)性”,給診斷帶來(lái)不必要的誤導(dǎo)。
對(duì)于家庭農(nóng)場(chǎng)和中小豬場(chǎng)而言,針對(duì)正在發(fā)病的豬和剛剛死亡的豬,使用非洲豬瘟抗原免疫層析快件卡是一個(gè)合適的選擇,病毒載量大診斷率更高更合理。
免責(zé)聲明:本文來(lái)自網(wǎng)絡(luò),如有侵權(quán)聯(lián)系管理員刪除
以上就是100唯爾(100vr.com)小編為您介紹的關(guān)于非洲豬瘟的知識(shí)技巧了,學(xué)習(xí)以上的豬場(chǎng)檢疫非洲豬瘟PCR熒光定量樣品采集的嚴(yán)格要求知識(shí),對(duì)于非洲豬瘟的幫助都是非常大的,這也是新手學(xué)習(xí)農(nóng)林牧漁所需要注意的地方。如果使用100唯爾還有什么問(wèn)題可以點(diǎn)擊右側(cè)人工服務(wù),我們會(huì)有專(zhuān)業(yè)的人士來(lái)為您解答。
本站在轉(zhuǎn)載文章時(shí)均注明來(lái)源出處,轉(zhuǎn)載目的在于傳遞更多信息,未用于商業(yè)用途。如因本站的文章、圖片等在內(nèi)容、版權(quán)或其它方面存在問(wèn)題或異議,請(qǐng)與本站聯(lián)系(電話:0592-5551325,郵箱:help@onesoft.com.cn),本站將作妥善處理。
非洲豬瘟課程推薦
農(nóng)林牧漁熱門(mén)資料
農(nóng)林牧漁技術(shù)文檔
- 1?呼和浩特工務(wù)段卓資東高鐵實(shí)訓(xùn)場(chǎng)建設(shè)項(xiàng)目議價(jià)采購(gòu)二次公告
- 2鐵小微帶你看:大南鐵國(guó)家高鐵實(shí)訓(xùn)基地,超牛!
- 3尚義職教中心首屆高鐵專(zhuān)業(yè)學(xué)生赴北京實(shí)習(xí)實(shí)訓(xùn)
- 4技能展示 | 高鐵專(zhuān)業(yè)實(shí)訓(xùn)技能展示
- 5磨礪青春、出彩中職——高鐵專(zhuān)業(yè)實(shí)訓(xùn)風(fēng)采
- 6陜西長(zhǎng)城鐵路技師學(xué)院,一所把高鐵實(shí)訓(xùn)搬進(jìn)課堂的高等院校
- 7喜訊!喜訊!1:1仿真高鐵實(shí)訓(xùn)設(shè)備進(jìn)入梧州電子科技學(xué)校
- 8云南工程職業(yè)學(xué)院高鐵實(shí)訓(xùn)基地建成啟用
- 9高鐵實(shí)訓(xùn)課走進(jìn)無(wú)錫東站!
- 10職教標(biāo)準(zhǔn)I高等職業(yè)學(xué)校城市軌道交通通信信號(hào)技術(shù)教學(xué)標(biāo)準(zhǔn)