動物疫病病原臨床樣品采集送檢注意事項
動物疫病病原臨床樣品采集送檢注意事項
張濤/中農(nóng)威特生物科技股份有限公司
近年來，隨著新發(fā)動物傳染病的不斷涌現(xiàn)，以及“老病”的繼續(xù)肆虐，我國豬傳染性疫病情況更加復(fù)雜，防控壓力日益增大，嚴重危害著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，同時對養(yǎng)豬場造成巨大的經(jīng)濟損失。目前，我國針對動物傳染性疾病采取的防控原則為：預(yù)防為主，防治結(jié)合。這就要求我們要搞好疫苗免疫接種工作，同時也要加強各種動物疫病病原體的檢測，加強豬群一些傳染性疫病抗體效價的檢測，定期對疫苗免疫后進行抗體滴度的監(jiān)測，做到以檢測數(shù)據(jù)指導(dǎo)科學(xué)合理的制定免疫程序。由于許多養(yǎng)豬場從業(yè)人員專業(yè)能力普遍較低，個人防護意識較弱，經(jīng)常出現(xiàn)采集的樣品不能用，或者由于存放、運輸不當，造成樣品的不合格，進而影響檢測結(jié)果的準確性，偶爾也有養(yǎng)豬場工作人員在樣品采集過程中感染某些動物疫病，現(xiàn)就采樣前準備、臨床樣品采集、保存和送檢方法，其他的一些注意事項做簡要介紹。
一、采樣前個人防護和器械準備
1.個人防護。樣品采集人員要充分認識到豬群可能感染有一些烈性的人獸共患病，在樣品采集的過程中可能會通過直接接觸、受損的黏膜等途徑傷及采集人員，也可能經(jīng)采集人員將病原體帶到外界造成擴散。因此在樣品采集前必須做好個人防護工作。穿戴安全可靠的的防護服（盡可能使用一次性高級別防護服）、一次性手套、防護帽、醫(yī)用口罩、護目鏡、膠鞋等。
2.器械。采集血液樣品時盡可能使用一次性塑料采血針或真空采血管，分離組織樣品時所有器械必須嚴格消毒，避免帶入其他病原體。應(yīng)根據(jù)豬只大小選擇采血針頭的大小，同時，準備碘伏、記號筆、抓豬器、耳標等器具。針對不同的采血對象選擇合適針頭；準備毛剪、消毒棉球、記號筆、自封袋等。
3.豬群。對豬群采集血液樣品最好在早晨，動物空腹時進行。病死豬病理解剖應(yīng)該有專業(yè)人員指導(dǎo)，謹慎操作，若發(fā)現(xiàn)血液凝固不良、天然孔出血等癥狀，懷疑為感染炭疽的病例時禁止解剖。采集的動物臨床樣品應(yīng)該具有群體代表性。
二、血液樣品的采集
血液是養(yǎng)豬場臨床送檢樣品中最常檢測的，主要是通過定期采集血液樣品并分離血清進行一些動物疫病抗體水平的檢測，用準確數(shù)據(jù)分析養(yǎng)豬場疫病防控壓力，進而制定科學(xué)合理的免疫程序。
1.豬群選擇。豬群接種疫苗后進行抗體水平監(jiān)測采集的血液樣品，應(yīng)在疫苗免疫后3周采集，采取隨機抽取樣品的方式，通常采集30~100份血液樣品就可以反映出所在豬群的整體疫苗免疫后抗體滴度情況。發(fā)病豬群采集血液樣品送高級別實驗室進行抗體檢測和疫病確診時，對所有出現(xiàn)典型臨床癥狀或有疑似癥狀的豬只盡可能都采集血液樣品進行檢測，用于某些動物病毒檢測的血液樣品應(yīng)在豬只發(fā)病初期，體溫升高時采集。對于定期進行的豬場疫病監(jiān)測及動物流行病學(xué)調(diào)查分析，采集樣品時應(yīng)根據(jù)豬群的數(shù)量按一定的比例隨機抽取血液樣品進行檢測。
2.采集方法。最好選用一次性的注射器或者一次性的真空采血管，經(jīng)耳緣靜脈或前腔靜脈采集，應(yīng)根據(jù)豬只大小選擇大小和長度都合適的針頭，盡量找準位置，避免反復(fù)多次扎針，減少豬只的應(yīng)激反應(yīng)，采集血液量一般為為4~8ml。對于種豬，由于體型較肥大，一般采用耳緣靜脈采集血液。具體步驟為：將種豬進行站立保定，擦洗干凈耳朵，用力對耳緣靜脈的近心端用力摁壓，配合使用酒精棉球來回涂擦、拍打耳緣靜脈使血管怒張，針頭朝著耳尖方向刺入血管，緩慢抽取所需血液量，然后用干棉球進行壓迫止血，對采集的血樣及時進行標號。
對于小豬或架子豬，主要采用前腔靜脈采血為主。小豬一般采用仰臥保定，用碘伏棉球?qū)︻i部皮膚消毒后，手持一次性獸用采血器輕輕扎向右側(cè)凹窩，稍微偏向中央位置，回抽注射器，見有回血，緩慢抽取所需血液量；架子豬通常站立保定，用抓豬繩套住豬的上頜骨用力向前上方拉，使得豬的頭頸部稍微上揚，可充分暴露豬的胸前凹窩，用碘伏棉球消毒凹窩處皮膚后，手持一次性獸用采血器，朝右側(cè)胸前凹窩最低處垂直扎針，回抽采血器見有回血，緩慢抽動采血器活塞采集所需血液量，采血后用酒精棉球壓迫止血。同時，對采集的血樣及時進行標號。
3.血清的分離。血液采集后應(yīng)稍微傾斜著室溫或37℃放置1~2h，可加速血清的析出，之后使用離心機（5000轉(zhuǎn)/min，離心5~10min）分離血清。若養(yǎng)豬場條件有限沒有離心機，可多靜置一段時間待血清完全析出后緩慢倒出上層清亮的血清，將分離的血清樣品低溫保存并盡快送檢。
三、組織樣品的采集
主要針對已出現(xiàn)臨床癥狀的豬群采集組織進行相關(guān)病原體的檢測。樣品采集前要對使用的器械進行嚴格的消毒，準備相關(guān)的容器，同時對所檢測的病原體采集何種組織樣品應(yīng)該有清晰的了解。采集多種不同部位的組織樣品時不能只重復(fù)使用一套器械和容器。
1.采樣豬的選擇。最好挑選臨床癥狀比較明顯的豬。檢測的病原體不同，所采集組織樣品的側(cè)重點也有所不同，對未確定檢測的病原體應(yīng)采集足夠的組織樣本，如果整群發(fā)病，應(yīng)選擇一定比例能代表整個群體發(fā)病特點的豬進行組織樣品的采集。對于病死豬，應(yīng)盡快采集組織樣品，保證樣品的新鮮，全面。對于其他有特殊條件要求的樣本采集，一定要嚴格按照要求進行采樣。
2. 樣品的選擇。盡可能選取有明顯病理變化部位的組織樣品，常見的組織樣品，主要以淋巴結(jié)、扁桃體、內(nèi)臟器官、流產(chǎn)胎兒、水泡皮、腸管、排泄物為主。采集的病料要具有典型的病變特征，應(yīng)在發(fā)病豬瀕死前或病死后短時間內(nèi)快速完成，盡量不超過6 h，以充分保證樣品的新鮮。同時，在病料采集過程中，應(yīng)嚴格注意個人防護和無菌操作，防止人為帶入外源病原體污染采集的組織樣品，造成檢測結(jié)果的不準確。
對于疑似細菌性病原體感染的病豬，在采集樣品前5~7 d 禁止使用廣譜的抗生素類藥物，在組織樣品采集過程中一定要盡量保證無菌操作，如果是采集的糞便，應(yīng)該盡可能的新鮮，或者可以用棉拭子伸入直腸采集糞便。
對于疑似病毒性病原體感染的病豬，如能引起豬只蹄、鼻、口腔等部位出現(xiàn)水泡，潰爛的五種常見的水泡型病毒（口蹄疫、豬水皰病、水皰性口炎、豬水皰疹、塞內(nèi)卡病毒A）的組織樣品，應(yīng)采集出現(xiàn)典型臨床癥狀部位的組織（蹄冠、蹄叉、口腔部的水泡皮、水泡液）；能引起母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎的病毒（豬繁殖障礙與呼吸綜合征、豬細小病毒、乙型腦炎病毒）的組織樣品，應(yīng)采集發(fā)病母豬的淋巴結(jié)、扁桃體以及流產(chǎn)、畸形胎兒的脾臟；能引起豬腹瀉的病毒（豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、輪狀病毒、新型冠狀病毒）的組織樣品，應(yīng)采集新鮮糞便、腸內(nèi)容物、小腸腸管。對于采集的組織樣品應(yīng)應(yīng)使用無菌容器密封保存，并在冷藏條件下盡快送檢。
四、樣品的保存和送檢
科學(xué)的保存方法和快速有效的送檢，是保證檢測結(jié)果真實可信，指導(dǎo)后續(xù)疫病防治的重要環(huán)節(jié)，應(yīng)切實遵循科學(xué)采樣、低溫密封保存、盡快送檢，做好生物安全措施，防止疫病的傳播，同時應(yīng)加強環(huán)保意識，采集的樣品檢測后應(yīng)進行無害化、分類處理，保證不污染生態(tài)環(huán)境。樣品送檢時要附帶養(yǎng)豬場實際的生產(chǎn)資料，包括免疫程序、疫苗批號、廠家信息、豬群健康信息和飼養(yǎng)方式等，以方便檢測人員能快速、全面、準確地檢測樣品和分析數(shù)據(jù)，同時能夠及時準確地向養(yǎng)殖戶反饋相關(guān)信息。
采集的血液樣品，應(yīng)盡量是血清樣品，并且血清樣品盡可能2℃~8℃冷藏保存，低溫條件下盡快送檢，一般從采樣到送檢的時間不超過7天，否則會造成樣品中抗體效價的降低；對于全血樣品，從采樣到送檢的時間一般不超過3天，否則會在送檢途中會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，影響血清的分離，進而影響檢測結(jié)果的準確性。
采集的檢測細菌性病原體的組織樣品，應(yīng)在2℃~8℃低溫條件下快速送檢，最好不要冷凍。采集的檢測病毒性病原體的組織樣品，應(yīng)在冷凍條件下短時間內(nèi)快速送檢，有條件的可以保存在小型液氮罐中快速送檢，如果不能及時送檢的，應(yīng)先凍存在在-80℃超低溫冰箱或液氮中，并盡快安排送檢。
五、樣品檢測
對于待檢樣品，檢測人員應(yīng)做好樣品信息登記工作，同時根據(jù)送檢樣品的不同性質(zhì)，采取不同的科學(xué)檢測方法開展快捷高效的樣品檢測和數(shù)據(jù)分析，及時向養(yǎng)殖戶出具真實可信的樣品檢測報告，并對所發(fā)現(xiàn)的問題給予相關(guān)的意見和建議，指導(dǎo)養(yǎng)豬場進行科學(xué)合理的疫病預(yù)防、治療以及凈化工作。
來源：《獸醫(yī)導(dǎo)刊》雜志第4期
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